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技術(shù)文章

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分子互作實(shí)驗(yàn)ChIP染色質(zhì)免疫共沉淀

更新時(shí)間:2025-07-10點(diǎn)擊次數(shù):190

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一、技術(shù)簡介

ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀)是一種研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的關(guān)鍵技術(shù),廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)鑒定、表觀遺傳修飾分析等領(lǐng)域。


二、技術(shù)原理

利用抗原抗體的特異性結(jié)合,將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來,能夠真實(shí)地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。

CHIP.png


三、應(yīng)用場景

1.轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究:鑒定轉(zhuǎn)錄因子(如p53、NF-κB)的DNA結(jié)合位點(diǎn)。

2.表觀遺傳學(xué):分析組蛋白修飾(如H3K27me3)在基因沉默中的作用。

3.疾病機(jī)制:探索癌癥中異常蛋白(如MYC)的基因組結(jié)合模式。

4.可與qpcr、seq等技術(shù)聯(lián)用。


四、技術(shù)優(yōu)勢

ChIP通過甲醛交聯(lián)捕獲細(xì)胞內(nèi)真實(shí)狀態(tài)下蛋白質(zhì)與DNA的動(dòng)態(tài)結(jié)合,避免體外實(shí)驗(yàn)的假陰性或假陽性,尤其適合研究轉(zhuǎn)錄因子等短暫結(jié)合事件。特異性抗體可精準(zhǔn)富集目標(biāo)蛋白結(jié)合的DNA片段,結(jié)合qPCR或測序(ChIP-seq)實(shí)現(xiàn)低至千細(xì)胞級別的檢測(如優(yōu)化試劑盒),靈敏度顯著,且具有廣泛適用性。


五、樣本類型

新鮮細(xì)胞(貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞)、凍存細(xì)胞、凍存組織、交聯(lián)后細(xì)胞樣本。


六、樣本需求

細(xì)胞樣本:約1×10^7個(gè)(可以是1個(gè)10cm皿,或以懸浮細(xì)胞形式存儲(chǔ)于離心管中,或1個(gè)T75瓶);

凍存組織:約70mg;

交聯(lián)細(xì)胞樣本:使用1%甲醛交聯(lián)處理細(xì)胞。


七、樣本準(zhǔn)備&運(yùn)輸

活細(xì)胞樣本:距離較近的可以將養(yǎng)在皿/T75瓶/離心管內(nèi)的新鮮細(xì)胞樣本常溫快遞(最遲次日達(dá))運(yùn)輸,本市內(nèi)可閃送或親自遞送,距離較遠(yuǎn)的,可-80℃凍存細(xì)胞干冰運(yùn)輸;

組織樣本&交聯(lián)后細(xì)胞樣本:-80℃凍存干冰運(yùn)輸。


八、需提供的試劑

檢測用ChIP級抗體。


九、實(shí)驗(yàn)周期

1-2周(不包含測序)


十、其他

后續(xù)檢測選擇RT PCR時(shí),需提供后續(xù)檢測的位點(diǎn)。

甲醛交聯(lián)細(xì)胞具體步驟:①在細(xì)胞皿中加入終濃度為1%的甲醛,37℃孵育10分鐘;②使用含[1mM PMSF,1μg/ml抑肽酶和1μg/ml pepstatin A]的冰冷DPBS洗滌細(xì)胞兩次。③將細(xì)胞刮入含有蛋白酶抑制劑的2ml冰冷的DPBS中,并轉(zhuǎn)移到離心管中,凍存寄送。

流程圖.png


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